液相色谱、EICOEE色谱柱、气相色谱 - 艾可依生物科技(山东)有限公司

公司新闻

液相色谱关于基线问题的几种处理方法

查看次数:3247 更新时间:2021-10-08

在液相色谱中仅有流动相通过检测器时,色谱图上记录的曲线叫做基线。基线问题是液相色谱中常见的问题,特别在做痕量分析时候,基线异常影响检测结果。

在液相色谱中仅有流动相通过检测器时,色谱图上记录的曲线叫做基线。基线问题是液相色谱中常见的问题,特别在做痕量分析时候,基线异常影响检测结果。

基线异常情况包括基线呈波浪形,基线漂移,基线上有毛刺等。

导致基线问题的因素有很多,例如系统污染、样品基质复杂以及仪器硬件问题,今天就和大家分享一下哪些因素可能导致基线异常以及处理方法。

ACE色谱柱

 漏液

特别是肉眼无法发现的微漏或者泵的内部漏液,会造成流速的变化和混合比例的变化,从而导致基线问题的产生。如果出现基线不稳可以从最简单的问题排查-漏液。检查管路各接头是否有漏液现象,例如:泵接头、进样器、色谱柱接头以及检测器各接头是否有渗漏的情况。


 气泡

流路中的气泡对基线有很大影响,所以进入到液相色谱系统的流动相要避免有气泡的产生。


溶剂过滤头脏很容易导致管路里产生气泡,所以要确保过滤头干净。如果溶剂过滤头有问题可以超声处理,若无法解决则需要更换溶剂过滤头。


流动相要脱气,脱气的方法有多种,例如超声脱气,在线脱气和氦气脱气等。流动相脱气越好,基线就会越好。仪器长时间不用再次启用时,需要更长时间的排气,泵头前端的气泡可以通过灌注流动相排出。


流通池里的气泡,可能是流动相中溶解了气体,也可能是仪器长时间不使用流通池干了导致的,体现在色谱图上就是基线莫名其妙的变大或者出现毛刺等。检测器中的气泡可以尝试通过冲洗流通池解决。


 色谱柱或流通池污染

色谱柱污染,对于基质复杂的样品,如果不经过前处理或者前处理不充分的时候,很容易导致色谱柱污染引起基线异常。如果常用的流动相无法冲洗干净,可以尝试使用比测试条件洗脱能力更强的流动相冲洗。


流通池污染,根据检测器的类型选择合适的溶剂冲洗,建议咨询仪器厂家。


 系统未稳定或未达到化学平衡

色谱柱在进样前要充分的平衡,平衡过程中将流速缓慢地提高,用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低,则需要较长的时间平衡)。


检测器在开启后也需要一段时间的稳定,例如紫外检测器,一般在开启后为了让检测器正常发挥功能,操作前应至少要预热30分钟。


 流动相

使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。流动相被污染或变质都会导致基线异常,尤其是在使用缓冲盐时,要尽量做到现配现用,避免长时间放置长菌。


 检测器能量低

检测器里的灯对发射能量有要求的,一旦能量衰减到一定程度,就会出现基线噪音变大,灵敏度降低等一系列影响使用的问题。例如使用紫外或者荧光检测器时,灯使用时间太久或者光路有脏,会引起基线噪音大。


 温度波动

隔离热源,或搬离临近的通风口,或增加流通池温度。尤其是示差,电化学以及电导检测器,即使很小的温度变化也会导致基线波动。


 选用不正确的检测波长(相对于溶剂)

检测器没有设定在最大吸收波长处。


 电噪音

检查仪器附近是否有干扰源,或者改变电路,除去来源。


用户登录

User login

立即注册 找回密码
用户登录

User login