背景及意义
EICOEE® WCX 96孔板（EBL-04405DF）特别为血浆样品中的儿茶酚胺类物质而设计，适用于LC-MS/MS临床检测研究。儿茶酚胺类物质主要是由肾上腺髓质、交感神经、副神经节的嗜铭细胞合成分泌。嗜铭细胞瘤是一种罕见的疾病，主要发生于肾上腺髓质的嗜铭细胞，会引起儿茶酚胺分泌增加。因此，检测儿茶酚胺类物质具有重要的临床意义。
01、样本前处理
1.1 血浆样本的预处理：
移取250μL血浆样品于1.5mL的离心管中，加入250μL浓度为50mM的乙酸铵溶液，再加入内标工作溶液，混合均匀，待用。
1.2 活化WCX板：
WCX96孔板需依次用200μL甲醇和200μL H2O预处理进行活化。
1.3 样品处理：
将混合均匀的待处理样品加入到经过活化的WCX96孔板中。
1.4 淋洗净化：
加样后，依次使用200μL浓度为20mM的乙酸铵和200μL 50:50的乙腈:异丙醇对孔进行清洗。然后将WCX96孔板在正压的氮气条件下干燥30s,以尽可能多地除去柱床中的溶剂。
1.5 洗脱：
使用2份50μL含有2%甲酸的85:15的ACN:H2O，将目标化合物由 WCX96孔板洗脱到96孔样品收集板中。
1.6 吹干复溶：
将收集板于氮气条件下进行吹干处理，吹干后用50μL含0.1%甲酸的水溶液进行复溶。
1.7上机检测：
将复溶液注入LC-MS/MS系统中进行检测。
备注：
①内标工作液的浓度和体积可根据实验室的方法进行适当调整。
②标准曲线的前处理方法与样本相同。
02、仪器条件
仪器：FH-6000MD UPLC-MS/MS
色谱柱:ACE C18-PFP (2.1 mmx50mm, 3μm)
柱温：45℃
进样量：5μL
流动相：A:水(含0.1%FA) B:甲醇(含0.1%FA)
洗脱方式：梯度洗脱
表1流动相梯度洗脱条件
电喷雾电压：3500 V
鞘气压力：25 arb
辅气压力：1 arb
离子传输管：300 ℃
辅气温度：360 ℃
采集方式：多反应监测
表2各组分母离子和子离子检测的离子对参数
03、实验结果
3.1血浆样本检测结果
左侧图为某进口品牌的WCX处理的血浆样本上机检测结果，右侧为EICOEE® WCX 96孔板处理的血浆样本上机检测结果。通过相同样本进行前处理，两者所得的结果相近。
3.2稳定性结果
该部分实验从不同的生产批次中抽取WCX板,对不同的孔位进行测试。从NMN和MN的结果可以看出，该产品的稳定性良好。
