使用ACE方法开发工具包(MDKS)进行色谱柱筛选
方法开发的四个简化步骤:
✦ ACE MDKs包含为互补选择性而精心设计的3支色谱柱
✦ 系统性色谱柱筛选是一种简单而又功能强大的方法,可以快速识别出合适的色谱柱
✦ 通过筛选2种不同的流动相有机改进剂可以使方法更全面
✦ 以下的流程图总结了如何通过4个简单步骤执行方法开发
选择色谱柱规格和粒径尺寸
依据LC系统和用户的偏好决定。对于400bar的HPLC系统而言,5μm 150*4.6mm是个不错的选择。对于600bar优化的HPLC洗脱,可使用2和3μm粒径的较短色谱柱(如100mm)。1.7μm粒径的短色谱柱(如50mm)适用于UHPLC。
如何确定合适的筛选梯度时间?
梯度时间可以使用公式1计算,VM可使用公式2计算。
请务必记住在下一次进样前,在梯度洗脱后需要以至少10倍Vm(柱体积)进行一次等梯度重新平衡。
为什么对色谱柱系统筛选?
✦ 改变色谱柱的固定相对选择性造成显著影响(图1)
✦ 在相同的流动相条件下,筛选不同的色谱柱可以帮助您更快地实现所需的分离,获得更好的分离度
✦ ACE MDKs将具有不同相互作用机制的色谱柱组合在一起,以最大限度地提高分离选择性以应对具有挑战性的混合物的分离
✦ 两种最受欢迎的ACE反相(RP)方法包(参加下表)包括了为利用不同的保留机制和最大化选择性而独特设计的固定相
✦ 所有六种固定相都可以在反相(RP)条件下使用,并且具有与C18一样的稳定性
✦ 同时还HILIC分析包,生物大分子300Å分析包和实心核颗粒(UltraCore)分析包
应用实例
✦ 对乙酰氨基酚及有关杂质
✦ 基于分析物的pKa和logD来选择流动相pH值
✦ 使用MeOH或MeCN作为最常见的方法开发(C18)的起点无法分离所有的分析物
✦ 需要进一步的方法开发
✦ 使用6支色谱柱/2种流动相进行筛选,快速识别6种方案
✦ 无须进一步的方法开发