亲水作用色谱（HILIC）是互补于RP的色谱技术，它可以成功的提高对极性非常大的物质的保留，同时还可以为极性物质和可离子化物质的混合物提供正交于RP的分离模式。它是通过采用高乙腈低水含量的流动相与极性固定相的组合，按亲水性（极性）由小到大的顺序梯度洗脱分析物得以实现的。
HILIC模式保留机理
在HILIC模式中，保留机制是液液分配、吸附作用、离子相互作用和亲水性保留作用的复杂的多模式组合，从而使HILIC与RPLC相比具有独特的选择性和保留特性。然而，单一的保留机制并非主导所有的分离。分析物的成功保留主要取决于流动相的组成（有机溶剂和pH）、流动相与固定相的相互作用及分析物的化学性质和结构组成。
HILIC模式综合了液液分配、离子交换和氢键等作用，因此在使用方面与反相色谱柱差异较大，注意事项如下：
01、流动相的选择性和洗脱强度
部分流动相必须含有极性溶剂（至少3%），这样亲水层才可吸附到固定相表面。通过降低流动相的总体极性，促使溶质分离至该水层，从而保留反相色谱无法保留的极性化合物。
对于HILIC中溶剂的洗脱强度，乙腈通常为基本的或弱的溶剂，而水则是最强的洗脱溶剂。
02、样品稀释剂
HILIC性能不佳（例如峰形扭曲、柱效低下和信号轻度低等）的主要原因之一与溶解样品的溶剂相关。一部分原因在于流动相主体和样品溶剂之间的粘度和极性差异。
由于HILIC中的弱流动相组分为乙腈，样品稀释剂理想上与初始流动相条件具有相同的乙腈组成。然而，难点在于大多数极性分析物在高有机比例溶剂中的溶解度有限。此外，将极性太强的洗脱溶剂（水、甲醇或者异丙醇）用做样品稀释剂对样品溶解度可能有负面影响。
水和甲醇均为强溶剂，避免单独作为稀释剂使用，推荐使用乙腈/甲醇(75/25)，若样品为水溶性，可先用水溶解，再用乙腈稀释后进样。
03、色谱柱的活化平衡
（1）活化流程
新色谱柱用纯乙腈排完气泡后，用50倍柱体积的乙腈/水(50/50)活化
色谱柱柱体积可参考下表：
（2）平衡
HILIC新色谱柱建议用50倍柱体积含有10mM缓冲盐或者0.2%添加剂溶液的（乙腈/水 50:50）平衡（一般根据分析方法确定平衡条件）后再测试样品，在常规使用前一般需要用20倍柱体积的初始流动相平衡色谱柱。不充分的平衡时间将导致保留时间漂移。
04、色谱柱的清洗及保存
（1）清洗
体系不含盐时，可以梯度洗脱从95/5(乙腈/水) 至50/50(乙腈/水)以去除极性污染物，如果不能解决问题，可用梯度洗脱从97/3(乙腈/水)至5/95(乙腈/水)冲洗。
（2）保存
短期存放可放在乙腈/水(95/5)中，若长期不使用，需保存在纯乙腈内，并将色谱柱两端的堵头拧紧封好，以防柱床“干涸”。
