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方法应用‖血浆中类固醇激素含量的分析 (EICOEE® MS HLB 96 孔板 )

查看次数:802 更新时间:2022-08-02

​EICOEE® MS HLB 96 孔板适用于对血浆样本的多种类固醇激素检测进行样本前处理,做到高通量快速处理。类固醇激素是一类非极性的小分子激素,是由胆固醇经一系列酶催化而来,它通过内分泌系统调节体内代谢过程。

EICOEE® MS HLB 96 孔板适用于对血浆样本的多种类固醇激素检测进行样本前处理,做到高通量快速处理。类固醇激素是一类非极性的小分子激素,是由胆固醇经一系列酶催化而来,它通过内分泌系统调节体内代谢过程。类固醇激素的检测可以帮助诊断许多内分泌紊乱的疾病,如先天性肾上腺皮质增生,醛固酮增多症和库欣综合征,具有重要的临床意义。


产品特点:


◆ pH 使用范围为 1.0-14.0


◆ 填料表面同时具有亲水性和疏水性基团,从而对各类极性、非极性化合物具有较均衡的吸附作用


◆ 净化复杂样品基质,纯化目标化合物,适用于类固醇激素等多种化合物


◆ 操作简单


一、仪器条件


仪器:Thermo Scientific TQS Endura


色谱柱:EICOEE® BD C18 (2.1mm×100 mm, 3 μm)


柱温:40 ℃


进样量:5 μL


流动相:A:水(含 0.1%FA) B:甲醇(含 0.1%FA)


洗脱方式:梯度洗脱


表1 流动相梯度洗脱条件

ACE色谱柱.png


电喷雾电压:3500 V


鞘气压力:15 arb


辅气压力:1 arb


离子传输管:360 ℃


辅气温度:380 ℃


离子化方式:ESI+


采集方式:多反应监测


表2 各组分母离子和子离子检测的离子对参数


ACE色谱柱.png


二、样本前处理


3.1 样本预处理:


移取100 µL 血浆样本于1.5 mL 的离心管中,再加入25 µL 内标,1800 rpm 涡旋1 min。然后加入200 µL 甲醇溶液,1800 rpm涡旋1 min。最后加入500 µL水,1800 rpm涡旋1 min。将样品在12000 rpm 离心5 min。


3.2 样品净化:


1) HLB 板活化:分别加入200 µL甲醇和200 µL 水到 MS HLB 96 孔板中;


2) 上样:取600 µL预处理上清液至96孔板中,低压力正压条件下使样液缓慢通过板孔;


3) 淋洗:依次用200 µL 0.1% 氨水的35% 甲醇溶液和200 µL 0.1% 甲酸的 35%甲醇溶液对板孔进行淋洗,然后将MS HLB 96孔板在正压的氮气条件下干燥30s,以尽可能多的去除柱床中的溶剂。


4)洗脱:使用200 µL 乙腈-甲醇(85:15)溶液,将分析物由MS HLB 96孔板中洗脱至96孔收集板中。


3.3 氮吹复溶:


将收集板于氮气条件下进行吹干处理,吹干后先用30 µL乙腈-甲醇(85:15)溶液进行复溶,涡旋混匀后再加入70 µL水,涡旋混匀。


3.4 上机检测:


将复溶液注入LC-MS/MS 系统中进行检测。


备注:


① 沉淀剂中包含内标工作液,浓度和体积可根据实验室的方法进行适当调整。


② 标准曲线的前处理方法与样本相同。


三、实验结果


表3 血浆中4种类固醇激素加标回收率结果


ACE色谱柱.png


从表3可以看出,不同梯度加标浓度下,4种目标化合物都有较好的回收率。


表4 稳定性对比结果


ACE色谱柱.png


该部分实验从不同的生产批次中抽取MS HLB 96 孔板,对不同的孔位进行测试。从目标化合物的结果可以看出,该产品的稳定性良好。


四、订购信息

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