液相色谱、ACE色谱柱、气相色谱 - 艾可依生物科技(山东)有限公司

公司新闻

Avantor® ACE®有效的亲水作用色谱 (HILIC)方法开发策略

查看次数:550 更新时间:2022-08-29

固定相和流动相的pH值是改变HILIC选择性的两个最强有力的参数。因此,评估这两个重要参数是方法开发的最佳起点。强烈推荐使用系统性筛选固定相和流动相,以便为样品确定最好的色谱柱/流动相组合。一旦固定相和流动相被确定,可以通过改变缓冲液强度和温度来进一步优化方法。

固定相和流动相的pH值是改变HILIC选择性的两个最强有力的参数。因此,评估这两个重要参数是方法开发的最佳起点。强烈推荐使用系统性筛选固定相和流动相,以便为样品确定最好的色谱柱/流动相组合。一旦固定相和流动相被确定,可以通过改变缓冲液强度和温度来进一步优化方法。

35.png

图1:HILIC方法开发流程图


图1流程图总结的HILIC方法开发策略的每一个步骤。


步骤1:若分析物的性质是已知的,则选择两种合适的流动相pH值来进行筛选。若分析物的性质是未知的,则使用pH值为3.0,4.7,6.0(这些pH值是为了最大限度地提高选择性的差异)。


步骤2:在三种ACE HILIC固定相和特定的pH值下。使用表1中规定的等度或梯度条件来筛选样品。若在等度模式下保留时间过短或过长,则可能需要调整强溶剂(水)的百分比。若保留时间的间隙太宽,导致在等度洗脱时分离度过高(即一些分析物显示出比其他分析物更强的保留),则需要尝试使用梯度洗脱来得到理想的结果。同样地,若在梯度洗脱时分析物的峰太紧密。则可能需要尝试等度洗脱方法。基于以上数据,选择最佳的固定相/流动相组合来进行进一步的方法开发。


步骤3∶通过优化其他参数如柱温和缓冲液浓度等来进一步优化方法。一旦方法开发完成就可以按照需要评估稳定性。

36.png

表1:建议的等度或梯度HILIC筛选条件




什么是HILIC?


-亲水作用色谱(HILIC)的概念由Alpert首次提出


-HILIC非常适用于分离和保留极性物质。包括极性中性和极性离子化的分析物


-HILIC分离一般使用极性固定相和含有高有机溶剂的流动相


-HILIC的机理十分复杂(参见图2),其在固定相、流动相以及固定相-流动相界面的富水层之间为分析物提供多种相互作用模式


37.png

图2:HILIC模式作用机理




您何时需要考虑使用HILIC?


-HILIC能够保留和分离亲水性或RPLC无法充分保留的极性至强极性的分析物


-当亲水性或极性至强极性分析物的logP值(亲脂性测量值)约为零或更低时


-通常而言,若分析物在梯度洗脱RPLC中比咖啡因先出峰的,则适用于HILIC模式分离(图3)


1661737908509926.png1661737886123888.png

图3:从梯度RPLC和LogP两个维度来看化合物HILIC分析适用性

用户登录

User login

立即注册 找回密码
用户登录

User login